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我对生物学涉及科学知识有一定理解，但当我查询新的基因编辑技术CRISPR涉及科学知识的时候，我却有些望而却步，该技术看上去非常复杂！但一位研究人员告诉他我，CRISPR（全称clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats）只是听得一起可怕，用一起非常简单，傻瓜都能用。我自指出还是比傻瓜聪慧得多，之后想检验一下这句话的真假。
于是，我就无聊地开始了我的CRISPR初体验。 涉及资料表明，CRISPR在遏止或敲除基因上效果最佳，因此我想试用CRISPR来敲除基因。
我原作了一个宏伟的目标：用CRISPR敲除一个免疫系统基因，我庞加莱，敲除该基因，可以增加Zika病毒所导致的损害。一旦顺利，这将大大推展Zika病毒涉及研究！（我的假设是，如果某个个体曾病毒感染过登革热，并有该病毒的抗体，那么CD32有可能有助驱动Zika病毒的自我复制。） RolandWagner是加州圣地亚哥SanfordBurnhamPrebys医学找到研究所SumitChanda实验室的博士后，他表示同意兼任我的CRISPR指导员。
Wagner来自奥地利，是一个经验丰富的攀岩爱好者，讨厌有条不紊地已完成工作。他查询分析了CD32基因的序列，CD32具备五个有所不同的蛋白质编码区。如果我们切割成其中一个蛋白编码区的DNA，该基因最有可能被敲除它将仍然传达CD32蛋白。生物学家RolandWagner（左）指导JonCohen展开建构CRISPR系统 CRISPR用于一行RNA将分子剪刀CRISPR的一部分，Cas9导向到基因组中的准确位点。
我们可以卖到一行RNA（gRNA），但Wagner并不想这么腊。他认为，他不确认gRNA的价格是多少，但假设出售gRNA要花上500美元，他们自己制备，就只要5美金。 gRNA序列能与我们想切割成的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列有序。
但是，基因组中的其它地方也有可能不存在与这段短序列一样宽的片段，并不会造成分子剪刀切割成错误的位点。这种脱靶效应不会相当严重地影响实验结果，避免脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。
为了使CRISPR极具特异性，在靶向的20个核苷酸外，Cas9还必须一段额外的序列：N-G-G，其中N可以是任何核苷酸。当Cas9在20个目标核苷酸后找到N-G-G时，马上融合并关上DNA双螺旋，随后gRNA与目标序列结合。最后Cas9切割成DNA的两条链。
为了制做gRNA，Wagner把我们检验的CD32序列粘贴到免费数据库OptimizedCRISPRDesign中，查询凸挨着N-G-G的、合乎我们拒绝的20个核苷酸序列。CD32中有41个附加片段。数据库扫瞄整个人类基因组，检查否其它地方也不存在完全相同的序列潜在的脱靶位点。
我们自由选择了一个仅有不存在于CD32中的序列。然后Wagner关上另一个网站，采购该段DNA序列。 DNA序列报废了，我第一次尝试了用于移液枪。
自从我30多年前毕业以来，我就没在实验室工作过。那时，我学会了一种有可能是由LouisPasteur发明者的移液技术：我把一根手指放到我的嘴里，然后把一种化学品吸食到一个厚的玻璃管里，吸足了量后，就用指尖捂住玻璃管。
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